style="width:1.96006in;height:0.65318in" /> (1) 本文是学习GB-T 34782-2017 蜂胶中杨树胶的检测方法 高效液相色谱法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了蜂胶中是否含有杨树胶的高效液相色谱鉴别方法的原理、试剂、材料、仪器、设备和试
验方法。
本标准适用于蜂胶及蜂胶乙醇提取物中杨树胶的检测。
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件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
蜂胶 propolis
工蜂采集树脂等植物分泌物与其上颚腺、蜡腺分泌物等混合形成的胶粘性物质。
3.2
蜂胶乙醇提取物 ethanol extracted propolis
乙醇萃取蜂胶后得到的物质。
3.3
杨树胶 extracted populus buds, leaves or
barks
杨属(Populus)
植物的芽、叶子或树皮等组织经人工熬制加工，再经乙醇提取而成的提取物。
3.4
杨树型蜂胶 poplar type propolis
杨属(Populus) 为主要植物来源的蜂胶。
水杨苷和邻苯二酚广泛存在于杨属和柳属植物的芽、叶子和树皮中。当这些芽、叶子和树皮经过煎
煮之后，水杨苷和邻苯二酚依然存在。而蜂胶中并不存在水杨苷和邻苯二酚，因此可以作为蜂胶中是否
掺有杨树胶的鉴别指标。
试样经75%乙醇提取后，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在213 nm
处检测水杨苷和邻苯二
酚的含量，从而判断蜂胶中是否含有杨树胶。
GB/T 34782—2017
实验室用水应符合 GB/T
6682规定的一级水。除非另有规定，所有试剂均为分析纯。
5.7 0.5%磷酸(5.4)溶液：量取5 mL 磷酸，用水定容至1 L。
5.8 标准贮备液：准确称取水杨苷(5.5)和邻苯二酚标准品(5.6)各10 mg,
分别用甲醇溶液(5.1)配制 成1.0 mg/mL
的标准溶液，于4℃冰箱保存，保持期3个月。
5.9
标准工作液：分别吸取适量的水杨苷和邻苯二酚标准贮备液(5.8),用甲醇溶液(5.1)分别稀释成水
杨苷浓度为0.005 mg/mL、0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.04 mg/mL和0.06 mg/mL
五个浓度，邻苯二 酚浓度为0.005 mg/mL、0.01mg/mL、0.02 mg/mL、0.04
mg/mL和0.06 mg/mL 五个浓度，现用现配。
5.10 滤膜：0.45 μm, 有机系。
6.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。
从被检样品的不同部位均匀取样50 g,冷冻，粉碎，混匀，作为备检样品。
称取2 g 蜂胶试样，用75%乙醇超声波提取30
min,料液比为1:15(质量：体积),反复提取3次，
合并滤液，离心过滤后旋转蒸发浓缩，或者称取1 g
蜂胶乙醇提取物试样，然后用75%乙醇超声溶解定
容至50 mL, 取上清液，0.45 μm 滤膜过滤，供液相色谱测定。
色谱柱：Sepax HP-Cis,柱长150 mm, 内径4.6 mm, 粒度5μm;
或性能相当的色谱柱。
流动相流速：1 mL/min。
梯度洗脱，洗脱程序参见附录 A 中 表 A.1。
检测波长：213 nm。
柱温：30℃。
GB/T 34782—2017
进样量：5 μL。
取 5 μL 样品溶液(8.1)、水杨苷和邻苯二酚标准工作液(5.9)分别进样分析。
水杨苷标准品、邻苯二酚标准品、杨树型蜂胶、杨树胶的色谱图分别参见附录 B
中 图 B. 1～ 图 B.4。
试样中水杨苷或邻苯二酚含量(X) 以毫克每克(mg/g) 表示，按式(1)计算：
style="width:1.96006in;height:0.65318in" /> (1)
式中：
c 、— 水杨苷或邻苯二酚标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
V — 试样最终定容体积，单位为毫升(mL);
A — 试样溶液对应的峰高或峰面积；
m ——样品质量，单位为克(g);
A 、——水杨苷或邻苯二酚标准溶液对应的峰高或峰面积。
将符合重复性要求的两个独立测定值的算术平均值作为测定结果(mg/g),
保留两位有效数字。平
行试验相对偏差不得超过2.0%。
本方法所检测的水杨苷和邻苯二酚为杨树胶中含有而蜂胶中不含有的物质。如果待测样品中检测
不到水杨苷，且邻苯二酚检测浓度在蜂胶乙醇提取物中低于0.21 mg/g,
或在蜂胶原料样品中低于 0.12
mg/g,则该样品为未检出杨树胶的样品；如果待测样品中检测不到水杨苷，但蜂胶乙醇提取物样
品中邻苯二酚检测浓度大于0.21 mg/g,
或待测原料蜂胶样品中邻苯二酚检测浓度大于0. 12 mg/g, 则
该样品判定为含有杨树胶的样品；如果待测样品中检测到水杨苷，则该样品判定为含有杨树胶的样品。
本标准在进样量为5μL 时，蜂胶乙醇提取物中水杨苷的最低检测限为0.065
mg/g, 邻苯二酚的最 低检测限为0.063 mg/g;
蜂胶原料中水杨苷的最低检测限为0.032 mg/g, 邻苯二酚的最低检测限为
GB/T 34782—2017
(资料性附录)
高效液相色谱梯度洗脱程序
高效液相色谱梯度洗脱程序见表A.1。
表 A.1 高效液相色谱法梯度洗脱程序
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GB/T 34782—2017
(资料性附录)
水杨苷标准品、邻苯二酚标准品、杨树型蜂胶、杨树胶的色谱图
水杨苷(标准品)色谱图见图 B.1。
style="width:11.50657in;height:6.23501in" />
说明：
S——水杨苷。
注：标液浓度0.04 mg/mL, 出峰时间12.219 min。
图 B.1 水杨苷(标准品)色谱图
GB/T 34782—2017
邻苯二酚(标准品)色谱图见图 B.2。
style="width:11.11324in;height:6.1666in" />
说明：
C— 邻苯二酚。
注：标液浓度0.03 mg/mL, 出峰时间13.851 min。
图 B.2 邻苯二酚(标准品)色谱图
杨树型蜂胶色谱图见图 B.3。
style="width:11.29999in;height:6.18811in" />
图 B.3 杨树型蜂胶色谱图
style="width:3.09333in" />GB/T 34782—2017
杨树胶色谱图见图 B.4。
style="width:10.82674in;height:5.79326in" />
说明：
S—— 水杨苷；
C—— 邻苯二酚。
图 B.4 杨树胶色谱图
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